CN102721775B - 一种将盐酸丙美卡因中间体ⅳ与其它中间体的高效液相色谱分离的方法 - Google Patents

一种将盐酸丙美卡因中间体ⅳ与其它中间体的高效液相色谱分离的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种<b>将盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的高效液相色谱分离的方法</b>，包括以下步骤：步骤一，取盐酸丙美卡因样品，用有机溶剂溶解盐酸丙美卡因样品，配制成每1ml含盐酸丙美卡因0.5～1.0mg的样品溶液,步骤二，设置液相色谱仪的流动相，流动相的流速0.6～1.2mL/min、检测波长232±3nm，以及设置液相色谱仪色谱柱的柱温箱20℃～40℃；步骤三，取步骤一中的样品溶液5-20μl注入经步骤二中设置的液相色谱仪内，完成盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的分离。

Description

一种将盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的高效液相色谱分离的方法
技术领域
本发明提供了一种将盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的高效液相色谱分离的方法。
背景技术
盐酸丙美卡因为一种表面麻醉剂，用于各种眼科手术及眼科检查的表面麻醉，与其它麻醉剂相比，具有快速、高效，对角膜毒副作用轻等优点。盐酸丙美卡因中间体IV分子式：C13H17NO5，化学名为3-硝基-4-丙氧基苯甲酸丙酯，中间体I，II，III，IV结构式分别如下：
中间体Ⅰ
中间体Ⅱ
中间体Ⅲ
中间体IV
为了准确地控制盐酸丙美卡因中间体的质量，需要将盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体进行有效地分离，但是目前采用的高效液相等度洗脱方式还不能实现盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的有效分离。
发明内容
本发明提供了一种将盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的高效液相色谱分离的方法，它可以实现盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的分离质量的准确控制。
本发明采用了以下技术方案：一种将盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的高效液相色谱分离的方法，包括以下步骤：步骤一，取盐酸丙美卡因样品，用有机溶剂溶解盐酸丙美卡因样品，配制成每1ml含盐酸丙美卡因0.5～1.0mg的样品溶液；步骤二，设置液相色谱仪的流动相，流动相的流速0.6～1.2mL/min、检测波长232±3nm，以及设置液相色谱仪色谱柱的柱温箱20℃～40℃；
步骤三，取步骤一中的样品溶液5-20μl注入经步骤二中设置的液相色谱仪，完成盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的分离。
本发明步骤一的有机溶剂为甲醇或乙醇。
本发明步骤二种液相色谱仪的流动相为：A泵为有机改性剂，B泵为缓冲盐溶液，以及设置液相色谱仪的梯度洗脱程序如下：
时间（min）A泵流动相(%)B泵流动相（%）
5-100-30100-70
10-2030-6070-40
20-306040
30-5060-040-100
50-600100，
有机改性剂与缓冲溶液的体积比随时间变化而变化，5分钟到10分钟，流动相A泵的体积逐渐从0%变化到30%，同时流动相B泵的体积逐渐从100%变化到70%，A泵流动相：B泵流动相为0-30：100-70；10分钟到20分钟，流动相A泵的体积逐渐从30%变化到60%，同时流动相B泵的体积逐渐从70%变化到40%，A泵流动相：B泵流动相为30-60：70-40；20分钟到30分钟，流动相A泵的体积保持60%不变，同时流动相B泵的体积保持40%不变，A泵流动相：B泵流动相为60：40；30分钟到50分钟，流动相A泵的体积逐渐从60%变化到0%，同时流动相B泵的体积逐渐从40%变化到100%，A泵流动相：B泵流动相为60-0：40-100；50分钟到60分钟，流动相A泵的体积保持0%不变，同时流动相B泵的体积保持100%不变，A泵流动相：B泵流动相为0：100。
本发明步骤二中的液相色谱仪采用碳十八烷硅烷键和硅胶为填充剂的色谱柱，色谱柱的规格为长度250mm、内径4.6mm、粒度5μm。
所述的有机改性剂为乙腈或甲醇。所述的缓冲盐溶液为0.05M磷酸二氢钾和0.02M庚烷磺酸钠加水溶解后，再加三乙胺调将PH至5.2得到的溶液。
本发明具有以下技术效果：本发明采用碳十八烷硅烷键和硅胶为填充剂的色谱柱，能有效分离盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体；选择甲醇为溶剂，确保样品能完全溶解；选择进样体积10μL，柱温为室温25℃，提高了色谱峰的对称性；选择流速1.0mL/min，能提高分离度；选择A泵为有机改性剂，有机改性剂为甲醇，B泵缓冲盐溶液为0.05M磷酸二氢钾，0.02M庚烷磺酸钠，三乙胺调PH至5.2的溶液，采用梯度洗脱实现盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的完全分离，实现了盐酸丙美卡因中间体纯度的检测，对实现盐酸丙美卡因中间体在盐酸丙美卡因药物合成和制剂生产过程的质量控制方面具有现实意义。
附图说明
图1为实施例一的高效液相色谱图。
图2为实施例二的高效液相色谱图。
图3为实施例三的高效液相色谱图。
具体实施方式
通过以下实施例进一步说明本发明。
实施例一
采用安捷伦LC-1200型号高效液相色谱仪、Apollo品牌碳十八硅烷键和硅胶为填充剂的色谱柱，色谱柱的规格为长度250mm、内径4.6mm、粒度5μm。
步骤一，分别取盐酸丙美卡因样品，样品内的中间体Ⅳ及中间体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各5mg，置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成每1ml含盐酸丙美卡因0.5～1.0mg的样品溶液，作为供试品溶液；
步骤二，设置液相色谱仪的流动相，即A泵为有机改性剂，B泵为缓冲盐溶液，以及设置液相色谱仪的梯度洗脱程序如下：
梯度一：时间（min）A泵流动相(%)B泵流动相（%）
5-101090
10-204060
20-406040
40-607030
601090，
当5-10分钟时，A泵流动相：B泵流动相为10:90，当10-20分钟时，A泵流动相：B泵流动相为40:60，当20-40分钟时，A泵流动相：B泵流动相为60:40，当40-60分钟时，A泵流动相：B泵流动相为70：30，当60分钟时，A泵流动相：B泵流动相为10：90，设置液相色谱仪的流动相流速0.6mL/min、检测波长230nm，以及设置液相色谱仪色谱柱的柱温箱20℃；
步骤三，取步骤一的供试品溶液20μl注入经步骤二设置的液相色谱仪，完成盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的分离，记录色谱图，结果见附图1。
在图1中，保留时间为5.577min、21.500min、29.475min的色谱峰分别为中间体Ⅱ、Ⅰ、Ⅲ的色谱峰，保留时间为33.798min为盐酸丙美卡因中间体Ⅳ的色谱峰。中间体Ⅲ与中间体Ⅳ的分离度达到25.69，完全符合《2005版中国药典》分离度不小于1.5的规定，表明盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体可以在同一色谱条件下达到很好的分离。
实施例二
采用安捷伦LC-1200型号高效液相色谱仪、Apollo品牌碳十八烷硅烷键和硅胶为填充剂的色谱柱，色谱柱的规格为长度250mm、内径4.6mm、粒度5μm。
步骤一，分别取盐酸丙美卡因样品，样品内的中间体Ⅳ及中间体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10mg，置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成每1ml含盐酸丙美卡因0.5～1.0mg的样品溶液，作为供试品溶液；
步骤二，设置液相色谱仪的流动相，即A泵为有机改性剂，B泵为缓冲溶液，以及设置液相色谱仪的梯度洗脱程序如下：
梯度二：时间（min）A泵流动相(%)B泵流动相（%）
5-100100
10-203070
20-307030
30-507030
50-601090
601090，
当5-10分钟时，A泵流动相：B泵流动相为0:100，当10-20分钟时，A泵流动相：B泵流动相为30:70，当20-30分钟时，A泵流动相：B泵流动相为70:30，当30-50分钟时，A泵流动相：B泵流动相为70：30，当50—60分钟时，A泵流动相：B泵流动相为10：90，当60分钟，A泵流动相：B泵流动相为10：90，设置液相色谱仪的流动相流速1.2mL/min、检测波长237nm，以及设置液相色谱仪色谱柱的柱温箱40℃；
步骤三，取步骤一的供试品溶液5μl注入经步骤二设置的液相色谱仪，完成盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的分离，记录色谱图，见图2.
在图2中，保留时间为5.667min、16.374min、22.059min的色谱峰分别为中间体Ⅱ、Ⅰ、Ⅲ的色谱峰，保留时间为28.384min为盐酸丙美卡因中间体Ⅳ的色谱峰，中间体Ⅲ与中间体Ⅳ的分离度达到25.78，完全符合《2005版中国药典》分离度不小于1.5的规定，表明盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体可以在同一色谱条件下达到很好的分离。
实施例三
采用安捷伦LC-1200型号高效液相色谱仪、Apollo品牌碳十八烷硅烷键和硅胶为填充剂的色谱柱，色谱柱的规格为长度250mm、内径4.6mm、粒度5μm。
步骤一，分别取盐酸丙美卡因样品，样品内的中间体Ⅳ及中间体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各8mg，置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成每1ml含盐酸丙美卡因0.5～1.0mg的样品溶液，作为供试品溶液；
步骤二，设置液相色谱仪的流动相，即A泵为有机改性剂，B泵为缓冲溶液，以及设置液相色谱仪的梯度洗脱程序如下：
梯度三：时间（min）A泵流动相(%)B泵流动相（%）
5-100100
10-203070
20-306040
30-506040
50-600100
600100，
当5-10分钟时，A泵流动相：B泵流动相为0:100，当10-20分钟时，A泵流动相：B泵流动相为30:70，当20-30分钟时，A泵流动相：B泵流动相为60:40，当30-50分钟时，A泵流动相：B泵流动相为60：40，当50—60分钟时，A泵流动相：B泵流动相为0：100，当60分钟，A泵流动相：B泵流动相为0：100，设置液相色谱仪的流动相流速1.0mL/min、检测波长232nm，以及设置液相色谱仪色谱柱的柱温箱25℃；
步骤三，取步骤一的供试品溶液10μl注入经步骤二设置的液相色谱仪，完成盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的分离，记录色谱图，结果见附图3。
在图3中，保留时间为3.580min、12.858min、21.715min的色谱峰分别为中间体Ⅱ、Ⅰ、Ⅲ的色谱峰，保留时间为27.501min为盐酸丙美卡因中间体Ⅳ的色谱峰，中间体Ⅲ与中间体Ⅳ的分离度达到27.26，完全符合《2005版中国药典》分离度不小于1.5的规定，表明盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体可以在同一色谱条件下达到很好的分离。

Claims (1)

1.一种将盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体的高效液相色谱分离的方法，包括以下步骤：
步骤一，取盐酸丙美卡因样品，用有机溶剂溶解盐酸丙美卡因样品，配制成每1ml含盐酸丙美卡因0.5～1.0mg的样品溶液，步骤一的有机溶剂为甲醇或乙醇；
步骤二，设置液相色谱仪的流动相，流动相的流速0.6～1.2mL/min、检测波长232±3nm，以及设置液相色谱仪色谱柱的柱温箱20℃～40℃，步骤二种液相色谱仪的流动相为：A泵为有机改性剂，B泵为缓冲盐溶液，以及设置液相色谱仪的梯度洗脱程序如下：
时间（min）A泵流动相(%)B泵流动相（%）
5-100-30100-70
10-2030-6070-40
20-306040
30-5060-040-100
50-600100，
有机改性剂与缓冲溶液的体积比随时间变化而变化，5分钟到10分钟，流动相A泵的体积逐渐从0%变化到30%，同时流动相B泵的体积逐渐从100%变化到70%，A泵流动相：B泵流动相为0-30：100-70；10分钟到20分钟，流动相A泵的体积逐渐从30%变化到60%，同时流动相B泵的体积逐渐从70%变化到40%，A泵流动相：B泵流动相为30-60：70-40；20分钟到30分钟，流动相A泵的体积保持60%不变，同时流动相B泵的体积保持40%不变，A泵流动相：B泵流动相为60：40；30分钟到50分钟，流动相A泵的体积逐渐从60%变化到0%，同时流动相B泵的体积逐渐从40%变化到100%，A泵流动相：B泵流动相为60-0：40-100；50分钟到60分钟，流动相A泵的体积保持0%不变，同时流动相B泵的体积保持100%不变，A泵流动相：B泵流动相为0：100，步骤二中的液相色谱仪采用碳十八烷硅烷键和硅胶为填充剂的色谱柱，色谱柱的规格为长度250mm、内径4.6mm、粒度5μm，所述的有机改性剂为乙腈或甲醇，所述的缓冲盐溶液为0.05M磷酸二氢钾和0.02M庚烷磺酸钠加水溶解后，再加三乙胺调将PH至5.2得到的溶液；
步骤三，取步骤一中的样品溶液5-20μl注入经步骤二中设置的液相色谱仪，完成盐酸丙美卡因中间体Ⅳ与其它中间体：中间体Ⅰ，中间体Ⅱ，中间体Ⅲ的分离。
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